近年來，國際上在開發(fā)用于治療嚴重和廣泛性疾病的人類多能干細胞 (hPSC) 衍生產(chǎn)品方面取得了重大進展。細胞起始材料的生物庫是提供安全且符合法規(guī)要求的細胞療法的關鍵組成部分。

在中國，這些發(fā)展的關鍵參與者是最近成立的國家干細胞資源中心 (NSCRC)?及其在廣州和上海的合作組織，它們共有600多個hPSC系正式記錄在中國科技部的干細胞登記處。

中國的人類多能干細胞生物庫的發(fā)展要迎來拐點了嗎？

本文，我們描述了中國在建立用于細胞療法制造的人類多能干細胞方面的最新進展，以及目前已建立的重要國內(nèi)和國際協(xié)調(diào)，以促進中國基于人類多能干細胞的產(chǎn)品按照國內(nèi)和國際標準轉化為臨床用途。

1、引言

最近幾年，國際上在開發(fā)用于治療嚴重和廣泛性疾病的人類多能干細胞 (hPSC) 衍生產(chǎn)品方面取得了重大進展。細胞起始材料的生物庫是提供安全且符合法規(guī)要求的細胞療法的關鍵組成部分。這需要仔細記錄供體細胞采購、細胞系生成、生物庫、質(zhì)量控制和向最終用戶發(fā)布的所有關鍵階段。

近年來，中國有關干細胞臨床應用的法規(guī)已得到徹底修訂，為基于hPSC的產(chǎn)品的開發(fā)提供了新的框架。中國干細胞生物學會也一直在制定干細胞使用的核心標準，而北京干細胞庫 (BSCB) 是制定這些標準的關鍵參與者。BSCB由中國科學院動物研究所 (IOZ-CAS) 于2007年成立。

2019年6月，BSCB重新指定為國家干細胞資源中心 (NSCRC)。NSCRC已與廣州和上海的合作組織合作，在中國科技部的干細胞登記處注冊了hPSC系，并且NSCRC還一直在與歐盟委員會資助的數(shù)據(jù)庫hPSCreg（www.hpscreg.eu）開展合作。

NSCRC現(xiàn)已開始使用其人類胚胎干細胞 (hESC) 系來生產(chǎn)八種適合臨床使用的細胞類型，這些細胞類型正在用于9項針對不同適應癥的臨床研究。IOZ-CAS也是國際干細胞銀行計劃 (www.iscbi.org) 的創(chuàng)始合作伙伴，該計劃將主要干細胞銀行聚集在一起，商定提供用于研究和臨床用途的多能干細胞的標準。

• 本文介紹了中國在建立經(jīng)認證可用于細胞治療生產(chǎn)的hPSC方面的最新進展，以促進中國基于hPSC的產(chǎn)品按照國家和國際標準轉化為臨床應用。
• 我們還首次介紹了中國科學院國家干細胞資源中心、新成立的干細胞與再生研究所 (ISCR) 和IOZ-CAS之間的最新合作，這些合作正在推動建立新的干細胞使用國家和國際標準。
• 我們還介紹了這些組織如何促進主要國家和國際干細胞機構之間的協(xié)調(diào)，以及國家干細胞資源中心為確定其細胞系是否適用于臨床研究而采取的方法。

2、中國建立并驗證的人類干細胞系

在中國，有一個正式的干細胞系評估程序，由中國科技部監(jiān)督，迄今為止已批準了600多個hPSC。這些hPSC大部分來自北京、上海和廣州的三個中心，每個中心都有hESC和人類誘導多能干細胞 (hiPSC)。

此外，其中47個細胞系還已在國際數(shù)據(jù)庫hPSCreg（www.hpscreg.eu）上注冊，該數(shù)據(jù)庫評估道德出處，例如知情同意和科學數(shù)據(jù)的驗證，以驗證該細胞系是否為hPSC。這些細胞系一旦通過hPSCreg認證，就會被歐盟委員會 (EC) 視為適合用于歐盟資助的研究項目。

3、NSCRC細胞庫的質(zhì)量和組成

自2007年以來，NSCRC已建立潔凈室設施和研究實驗室，生產(chǎn)hESC系和經(jīng)批準的hESC衍生產(chǎn)品類型，這些產(chǎn)品均根據(jù)中國食品藥品監(jiān)督管理局 (CFDA) 的良好生產(chǎn)規(guī)范 (GMP) 許可生產(chǎn)。

NSCRC是IOZ-CAS的一個部門，已發(fā)表了大量關于其在臨床使用的hESC系的儲存和分化方面的工作的高質(zhì)量科學論文，并在干細胞領域的標準制定中發(fā)揮著重要的國家和國際作用。

國家干細胞資源中心是中國第一家根據(jù)ISO9001:2015認證獲得臨床使用細胞系供應資格的多能干細胞庫，并定期接受CFDA的GMP檢查。它也是中國第一家成功通過中國國家認可委員會 (CNAS) 檢查的生物庫，符合國際標準組織 (ISO) 于2019年發(fā)布的通用生物庫ISO20387標準。

如今，國家干細胞資源中心已制備了350多個hESC主細胞庫，其中進入臨床試驗的細胞均經(jīng)過獨立測試，并由國家食品藥品檢定研究院 (NIFDC) 認證可用于臨床。整個庫提供了具有多種人類白細胞抗原 (HLA) 的細胞，可能有助于針對中國人口中70%的HLA-A、HLA-B進行細胞藥物的組織類型匹配。

國家食品藥品監(jiān)督管理局細胞系在其制備的15個不同方面接受記錄可追溯性的檢查，涵蓋細胞系開發(fā)的所有階段，從捐贈者同意、胚胎移植到NSCRC，到在進行臨床試驗或研究工作之前進行儲存和測試。

所有文件都整理到一份單獨的檔案中，稱為“Q-Book”，用于每個單獨的細胞系，以提供中央?yún)⒖甲鳛槠溥m合臨床使用的證據(jù)。所有用于臨床的細胞系的詳細測試方案于2017年首次發(fā)布，作為NSCRC生物庫流程的一部分進行的測試總結在下面的要點列表中。

1. 細胞身份（DNA短串聯(lián)重復和同工酶分析）。
2. 細菌、真菌和支原體檢測，包括內(nèi)毒素檢測。
3. 檢測特定病毒（人類免疫缺陷病毒（I和II）、人類肝炎病毒（B和C）、Epstein-Barr病毒、人類巨細胞病毒和梅毒螺旋體。
4. 一旦選定細胞系用于臨床研究，就會進行一般病毒污染測試，包括逆轉錄酶活性、雞胚尿囊液血凝試驗、接種動物存活率以及牛和豬病毒的其他測試。
5. 細胞特征：
6. 細胞培養(yǎng)中典型的hESC系形態(tài)，
7. 使用免疫熒光法和RT-PCR檢測干細胞相關標志物，
8. 胚狀體分化產(chǎn)生的多能性潛力，
9. 核型（中期擴散的Geimsa顯帶）。

這里報告的所有細胞特性分析均由國家干細胞資源中心工作人員根據(jù)國家干細胞資源中心質(zhì)量管理體系下制定的SOP執(zhí)行。NIFDC是干細胞產(chǎn)品獨立質(zhì)量控制的國家中心，對選定用于臨床研究的細胞系主庫存樣品進行了廣泛的安全測試。

IOZ-CAS生物醫(yī)學倫理委員會審查并批準了NSCRC細胞系在研究和臨床應用中的使用，捐贈IVF中心也審查并批準了NSCRC細胞系在臨床應用中的使用。后者的批準程序是為了確保所有參與細胞系采購和開發(fā)的人員都能接受捐贈胚胎細胞的未來預期用途。NSCRC衍生的所有細胞系都被視為將用于開發(fā)基于細胞的藥物。

因此，所有細胞系（包括最近分配給研究用途的細胞系）都以與用于基于細胞的藥物開發(fā)的細胞系完全相同的方式和在相同的設施中記錄和開發(fā)。希望在自己的研究中使用NSCRC細胞系的研究人員可以聯(lián)系NSCRC的作者。

4、多能干細胞的臨床應用

國家干細胞資源中心開展了一系列本文未討論的轉化研究，并已建立了九種不同的分化hESC產(chǎn)品方案用于細胞治療（圖1），每種方案均由NIFDC獨立驗證。

2019年12月，國家衛(wèi)生健康委員會 (NHC) 和CFDA批準了69項注冊的干細胞臨床研究/試驗。其中，大多數(shù)基于hPSC的臨床試驗（9項中的7項）由NSCRC進行。其中包括三項使用中胚層衍生細胞類型（“M細胞”）針對三種適應癥（卵巢早衰、子宮粘連和關節(jié)半月板軟骨衰竭）的臨床研究，三項使用視網(wǎng)膜色素上皮細胞樣產(chǎn)品針對“干性”年齡相關性黃斑變性（AMD）或視網(wǎng)膜色素變性（NCT03944239）的臨床研究，以及一項針對帕金森病的研究（NCT03119636）。

所有這些研究均已獲得CFDA批準，然后才在clinicaltrials.gov和WHO臨床試驗數(shù)據(jù)庫中注冊。M細胞產(chǎn)品還被用于治療子宮粘連（NCT04232592），最近還在一些臨床試驗中用于恢復COVID-19引起的嚴重肺部疾病病例的肺功能（NCT04331613）。轉化工作也在不斷取得進展，以開發(fā)hESC衍生的肝細胞樣細胞，用于肝脂肪變性的臨床治療。

5、參與多能干細胞標準化政策制定

國家干細胞資源中心在再生醫(yī)學和生物庫界的生物庫和其他生物加工標準的制定中發(fā)揮著非常積極的領導作用。在中國，國家干細胞資源中心積極參與干細胞標準工作組，該工作組在過去五年中在中國干細胞生物學會的主持下制定了三項中國國家標準。

其中第一項標準針對干細胞的采購和一般使用，第二項標準針對hESC的技術要求、測試方法、測試規(guī)定、使用說明、標簽、包裝、儲存和運輸。

第三項標準針是對多能干細胞標準制定。2023年9月23日，第四屆中國干細胞與再生醫(yī)學協(xié)同創(chuàng)新平臺大會暨首屆金鳳干細胞論壇在重慶舉行，大會正式發(fā)布了我國首個人源干細胞國家標準《生物樣本庫多能干細胞管理技術規(guī)范》(GB/T42466-2023)。

第四屆中國干細胞與再生醫(yī)學協(xié)同創(chuàng)新平臺大會暨首屆金鳳干細胞論壇23日在重慶舉行，大會正式發(fā)布了我國首個人源干細胞國家標準《生物樣本庫多能干細胞管理技術規(guī)范》(GB/T42466-2023)。

這一國家標準的發(fā)布，標志著我國在干細胞樣本庫管理上有了標準技術支撐，對于推動我國干細胞研究和應用的規(guī)范化、標準化發(fā)展具有重要意義，也為干細胞領域后續(xù)相關標準的制定提供了先行示范。

國家干細胞研究中心前主任周琪教授大力推動干細胞領域的國際標準化，并推動制定了兩項ISO標準，即多能干細胞生物庫標準（ISO/WD 24603: 2020 (E)）、小鼠和人類多能干細胞的建立、維護、特性描述和分配要求以及細胞培養(yǎng)中的微生物檢測標準（ISO TC76 WG3標準正在制定中，即選擇檢測哺乳動物細胞培養(yǎng)中微生物污染的方法的通用指南）。

他也是國際干細胞論壇 (ISCF) 的創(chuàng)始成員之一和現(xiàn)任主席，該論壇于2003年在英國醫(yī)學研究理事會的George Radda教授領導下成立，旨在資助只能通過國際協(xié)調(diào)才能進行的合作。周教授還是ISCF支持的項目之一國際干細胞銀行計劃 (www.iscbi.org) 的指導小組成員。這項活動協(xié)調(diào)了多能干細胞庫專家就提供高質(zhì)量細胞用于研究和臨床應用的關鍵問題達成的共識。

6、科學合作與培訓

NSCRC與眾多中國和國際研究團體合作，NSCRC工作人員還參與了許多國際項目，包括與國際帕金森病項目G-Force合作（http://www.gforce-pd.com/）、為開發(fā)用于疾病建模的歐洲iPSC生物庫 (EBiSC) 提供咨詢（www.ebisc.org）并作為hPSCreg數(shù)據(jù)庫的合作伙伴參與hPSC的開發(fā)（www.hpscreg.eu）。

7、未來

2019年9月，NSCRC主任周琪教授組織成立了國家干細胞資源中心創(chuàng)新聯(lián)盟，該聯(lián)盟匯集了中國九個最重要的細胞和干細胞生物庫中心，旨在建立一個共享標準的科學卓越網(wǎng)絡，并為中國建立中央銀行資源。自動化干細胞培養(yǎng)方面的國家合作也在開展中。

未來，除了與hPSCreg（www.hpscreg.eu）合作外，NSCRC還計劃為中國建立一個多能干細胞注冊中心，以便與hPScreg等其他注冊中心協(xié)調(diào)，促進統(tǒng)一程序并促進干細胞數(shù)據(jù)的國際交流。

中國一直積極主動地投資干細胞研究和轉化研究，以促進公共衛(wèi)生的重大利益，作為該計劃的一部分，NSCRC和IOZ-CAS期待繼續(xù)并進一步為干細胞研究做出重大貢獻。

主要參考資料：Stacey GN, Hao J. Biobanking of human pluripotent stem cells in China. Cell Prolif. 2022; 55:e13180. doi:10.1111/cpr.13180

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